郭悦承 陆伦根

上海交通大学附属第一人民医院消化内科

 

编者按：

 

第72届美国肝病研究学会（American Association for the Study of Liver Diseases，AASLD）年会于2021年11月12日至15日在美国加利福尼亚州阿纳海姆以虚拟数字会议（The Liver Meeting Digital Experience, TLMdX）的形式召开。会议期间，美国弗吉尼亚联邦大学医学院Arun J Sanyal教授有一场关于“ACCURATE DIAGNOSIS OF NASH USING NOVEL PROTEASE BASED LIQUID BIOPSY”的主题报告。《国际肝病》特邀上海交通大学附属第一人民医院消化内科陆伦根教授对该报告研究进行点评。

 

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是最常见的慢性肝病，可进展至非酒精性脂肪性肝炎（NASH），严重威胁人类健康。NAFLD诊断的“金标”准是采用肝穿刺进行肝脏活检病理学检查，目前尚无准确的、非侵入性的手段作为肝活检的替代方法。Glympse公司先前开发了可注射蛋白酶活性生物传感器来诊断NASH。LBx-NASH是基于此平台技术的简化液态活检方法。在今年的AASLD年会上，Dr. Arun J Sanyal团队报道了一项运用LBx-NASH技术诊断NASH的研究。

 

在这项研究中，该团队分别采集了来自下列动物和患者血浆的样本：（1）喂养胆碱缺乏高脂饮食或正常饮食（n=10~28）的C57BL/6小鼠；（2）35例经Fibroscan或肝活检证实的NASH患者和24例健康对照者；（3）76例经肝脏活检已证实NASH的队列样本；（4）12名健康和肥胖对照样本（无糖尿病、肝病或其他合并症）。这项研究根据NASH CRN标准的组织学评分进行疾病分期，并通过荧光法和ELISA试剂盒测定血浆中的生物传感器和蛋白酶丰度。

 

结果显示，血浆中Glympse生物传感器的蛋白水解裂解在预测NASH与健康对照以及检测饮食诱导的小鼠NASH消退方面非常有效（AUC均为1.00）。NASH小鼠中裂解最显著的生物传感器是N11，这是一种感应组织蛋白酶L（CTSL）活性的肽。在NASH诊断方面，血浆中CTSL活性远远优于CTSL丰度（AUC=1.00 vs. AUC=0.52；95%CI：0.35~0.67，n=28）。与健康对照组（n=24）相比，N11在3个独立的人类NASH试验队列（n=35）中可以显著区分NASH与健康对照组（P=0.003）。该研究还筛选了600多个肽底物，以确定由20个生物传感器组成的LBx-NASH，用以研究NASH中的多种疾病生物学特征。在88个人类NASH和对照血浆样本中，LBx-NASH预测健康和肥胖对照组的AUC=0.97（95%CI：0.93~1.00），并且与性别、肥胖和2型糖尿病无关。

 

近年来，NASH的液态活检方法一直是肝病的热门研究领域。有研究表明，NAFLD患者的血清同型半胱氨酸（Hcy）浓度显著高，并且Hcy浓度与肝脏脂肪变性的严重程度呈正相关。因此，血浆Hcy水平可用于区分NASH和单纯性脂肪变性。另一项研究发现，过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的DNA甲基化与纤维化相关，可用作评估NASH严重程度的预测指标。此外，与健康个体相比，NAFLD患者体内谷胱甘肽（GSH）的前体如谷氨酰胺、甘氨酸和丝氨酸等含量会减少，而碱性磷酸酶、脯氨酸和羟脯氨酸（胶原蛋白的组成部分）水平有所升高。这些都有望成为诊断和评估NASH的非侵入性指标。

 

有学者发现，肝脏疾病特异性蛋白酶会切割部分生物传感器，而本研究中提到的液态活检技术可检测这些蛋白酶活性。最近，该公司发布了一项包括18名注射生物传感器的志愿者临床数据。数据表明生物传感器注射液可以安全耐受地进入人体，并可通过尿液进行最终检测。而在Dr. Arun J Sanyal团队的这项研究中，LBx-NASH可运用荧光蛋白酶传感器直接测量蛋白酶活性。这不仅显著提高了检测的准确性，还可提高患者的可及性和便利性。

 

总之，使用蛋白酶生物传感器的Glympse液体活检方法可以非常准确地从健康人和肥胖对照中识别NASH。这种诊断方法有助于筛选出需要进一步临床管理的NASH患者，并减少不必要的检查和侵入性肝活检。该技术有望在NASH临床试验中进行前瞻性研究。